acessoestruturadisciplinasdocentesinformacoescontactoslinks
  Disciplinas > Microbiologia Molecular  
 
   
   
Nome Microbiologia Molecular
Código 61983
Departamento DBV
Prof Responsável Mário Almeida Santos
Posição na Lic BMG 4º ano, 1º sem, Obrigatória
Créditos ECTS: 8, UC: 4
Posição em outros cursos  
Pré-requisitos Conhecimentos gerais de microbiologia, biologia celular e biologia molecular de procariotas

Fundamentação


Do ponto de vista do conteúdo informativo a disciplina de Microbiologia Molecular vem no seguimento de disciplinas que a precedem que focam aspectos gerais da microbiologia e genética de procariotas. Embora as disciplinas anteriores tenham preparado os alunos para a conscencialização da diversidade, patente quer nos processos bacterianos quer nos mecanismos que regulam a expressão génica, o conhecimento adquirido não lhes permitiu ainda, em muitos casos, a percepção de que a adaptabilidade é um dos principais factores que caracterizam os microrganismos e a essência do seu sucesso evolutivo. Torna-se igualmente importante que numa fase posterior da aprendizagem seja fornecida aos alunos uma visão integrada das duas áreas (Biologia microbiana e Biologia molecular). A disciplina de Microbiologia Molecular procura assim ter a sua tónica na vida dos microrganismos, focando essencialmente exemplos demonstrativos da sua flexibilidade na resposta a estímulos ambientais, utilizando a linguagem da biologia molecular- indispensável para o entendimento dos mecanismos sobre os quais se alicerça essa flexibilidade (fenómenos de detecção e transdução de sinais).


Programa Teórico


A disciplina de Microbiologia Molecular foca essencialmente mecanismos moleculares demonstrativos da flexibilidade microbiana na resposta a estímulos ambientais. As aulas teóricas incidem em três temas fundamentais, abordados sequencialmente:
A) "Localização, secreção e direccionamento de proteínas": são focados os mecanismos que (i) distribuem as proteínas pelos diferentes compartimentos sub-celulares, (ii) que regulam a sua estabilidade e (iii) que permitem a sua exportação para o exterior.
B) "Transdução de sinais e mecanismos adaptativos": discute-se a diversidade de sinais (externos ou internos) aos quais as bactérias respondem, (ii) a natureza dessa resposta e (iii) os mecanismos que garantem a adequação dessa resposta. A importancia de fenómenos de modificação reversível de proteínas nos processos de transdução de sinais é realçada.
C) "Comunicação celular e interacções com outros organismos": fenómenos que resultam de uma estratégia populacional e não propriamente da actividade das células bacterianas enquanto "indivíduos". Os agentes sinalizadores que estão na base destes "comportamentos sociais" são, em boa parte, moléculas libertadas pelos próprios microrganismos e apenas reconhecidas a partir de uma concentração crítica que reflecte a densidade populacional ("sensores de quorum"). Este bloco de aulas inclui tópicos como diferenciação celular em procariotas, estabelecimento de relações simbióticas ou mecanismos de virulência.

A bibliografia posta à disposição dos alunos é constituída por um conjunto de publicações actualizadas, essencialmente artigos de revisão.


Programa Prático


É objectivo das aulas práticas desta disciplina treinar os alunos na prática da investigação científica. Nesta óptica, os alunos são confrontados com alguns dos problemas em estudo no grupo de investigação do regente da disciplina e que constituem o ponto de partida para a realização de experiências concretas- algumas de resultado previamente estabelecido e outras de resultado desconhecido à priori. A natureza das experiências varia consoante o ano, já que dependem da evolução da investigação em curso. Alguns dos temas abordados incluem (i) organização genómica de bacteriófagos (ii) secreção e actividade de hidrolases de peptidoglicano (iii) receptores fágicos em Bacillus subtilis.

Do ponto de vista metodológico são utilizadas técnicas de microbiologia geral e biologia molecular (sistemas de expressão génica para bactérias Gram- e Gram+, mutagénese por inserção in vivo, mutagénese dirigida in vitro, fusões génicas, transformação, electroforese de DNA e proteínas, análise de Western, etc).


Resultados Expectáveis

• Sólido conhecimento de mecanismos de direccionamento/localização/secreção de proteínas em bactérias
• Percepção da diversidade de mecanismos de detecção e transdução de sinais em procariotas
• Integração de conhecimentos a nível avançado de biologia microbiana e biologia molecular
• Treino na análise crítica e discussão de artigos científicos na área da Microbiologia Molecular
Literatura aconselhada

Bukau et al (2000). Getting newly synthesized proteins into shape. Cell 101: 119-122

Herman & D’Ari (1998). Proteolysis and chaperones: the destruction/reconstruction dilemma. Curr.Opin. Microbiol., 1: 204-209

Yura & Nakahigashi (1999). Regulation of the heat shock response. Curr.Opin. Microbiol., 2: 153-158

Ades (2004). Control of the alternative sigma factor sigmaE in Escherichia coli. Curr.Opin. Microbiol. 7: 157-162

Raivio & Silhavy (1999). The sigmaE and Cpx regulatory pathways: overlapping but distinct envelope stress responses. Curr.Opin. Microbiol, 2: 159-165

Sauer et al. (2000). Chaperone-assisted pilus assembly and bacterial attachment. Curr. Opin. Struct. Biol. 10: 548-556

Hernday et al (2002). Self-perpetuating epigenetic pili switches in bacteria. PNAS 99: 16470-16476

Mori & Ito (2001). The Sec protein-translocation pathway. Trends in Microbiol. 9: 494-500

Murakami et al (2004)- translation arrest of SecM is essential for the basal and regulated expression of SecA. PNAS 101: 12330-12335

Campo et al. (2004). Subcellular sites for bacterial protein export. Mol. Microbiol. 53: 1583-1599

Berks et al. (2000). The Tat protein export pathway. Mol. Microbiol. 35: 260-274

Hatzixanthis et al (2003). A subset of inner membrane proteins integrated by the twin-arginine translocase. Mol. Microbiol. 49: 1377-1390

Novick (2000). Sortase: the surface protein anchoring transpeptidase and the LPXTG motif. Trends in Microbiol. 8: 148-151

Dijkstra & Keck (1996). Peptidoglycan as a barrier to transenvelope transport. J. Bacteriol. 178: 5555-5562

Henderson et al (1998). The great escape: structure and function of the autotransporter proteins. Trends in Microbiol. 6: 370-378

Jacob-Dubuisson et al. (2001). Two-partner secretion in Gram negative bacteria: a thrifty, specific pathway for large virulence proteins. Mol. Microbiol. 40: 306-313

Thanabalu et al (1998). Substrate-induced assembly of a contiguous channel for protein export from E. coli: reversible bridging of an inner membrane translocase to an outer membrane exit pore. Embo J. 17: 6487-6496

Andersen et al. (2000). Chunnel vision. 1: 313-318

Sandkvist (2001). Biology of type II secretion. Mol. Microbiol. 40: 271-283

Smeets & Kusters (2002). Natural transformation in Helicobacter pylori: DNA transport in an unexpected way. Trends in Microbiol. 10: 159-162

Lai & Kado (2000). The T-pilus of Agrobacterium tumefaciens. Trends in Microbiol. 8: 361-367

Christie (2001). Type IV secretion: intracellular transfer of macromolecules by systems ancestrally related to conjugation machines. Mol. Microbiol. 40: 294-305

Aldridge and Hughes (2001). How and when are substrates selected for type III secretion? Tends in Microbiol. 9: 209-214

Macnab (2003). How bacteria assemble flagella. Ann. Rev. Microbiol. 57: 77-100

Bennett and Hughes (2000). From flagellum assembly to virulence: the extended family of typeIII export chaperones. Trends in Microbiol. 8: 202-204

Blair (1995). How bacteria sense and swim. Ann. Rev. Microbiol. 49: 489-522.

Shimizu et al. (2000). Molecular model of a lattice of signaling proteins involved in bacterial chemotaxis. Nature Cell Biol. 2: 792-796

Tisa & Adler (1995). Cytoplasmic free Ca2+ level rises with repellents and falls with attractants in Escherichia coli chemotaxis. PNAS 92: 10777-10781

Lybarger & Maddock (2000). Differences in the polar clustering of the high- and low-abundance chemoreceptors of Escherichia coli. PNAS 97: 8057-8062

Cantwell et al.,(2003). CheZ phosphatase localizes to chemoreceptor patches via CheA-short. J. bacterial. 185: 2354-2361

Mc Cleary et al. (1993). Is acetyl phosphate a global signal in Escherichia coli? J. Bacteriol. 175: 2793-2798

Bruckner & Titgemeyer (2002). Carbon catabolite repression in bacteria: choice of the carbon source and autoregulatory limitation of sugar utilization. FEMS Microb. Lett. 209: 141-148

Reitzer & Schneider (2001). Metabolic context and possible physiological themes of sigma 54- dependent genes in Escherichia coli. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 65: 422-444.

Ninfa & Atkinson (2000). PII signal transduction proteins. Trends in Microbiol. 8: 172-179.

Silver & Walderhaug (1992). Gene regulation of plasmid and chromosome-determined inorganic ion transport in bacteria. Microbiol. Rev. 56: 195-228

Postle & Kadner (2003). Touch and go: tying TonB to transport. Mol. Microbiol. 49: 869-882
Nystrom (1999). Starvation, cessation of growth and bacterial aging. Curr. Opin. Microbiol. 2: 214-219

Zheng et al (1999). OxyR and SoxRS regulation of fur. J. Bacteriol. 181: 4639-4643.

Nystrom (2003). Conditional senescence in bacteria: death of the immortals. Mol. Microbiol. 48: 17-23

Jishage et al. (2002). Regulation of sigma factor competition by the alarmone ppGpp. Genes & Development, 16: 1260-1270

Nystrom (2004). Growth versus maintenance: a trade-off dictated by RNA polymerase availability and sigma factor competition? Mol. Microbiol. 54: 855-862

Hengge-Aronis (2002). Signal transduction and regulatory mechanisms involved in control of the sigma S subunit of RNA polymerase. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 66: 373-395

Hecker & Volker (1998). Non-specific, general and multiple stress resistance of growth-restricted Bacillus subtilis cells by the expression of the sigma B regulon. Mol. Microbiol. 29: 1129-1136

Akbar et al. (2001). New family of regulators in the environmental signaling pathway which activates the general stress transcription factor sigma B of Bacillus subtilis. J. Bacteriol. 183: 1329-1338

Kim et al (2004). In vivo phosphorylation of partner switching regulators correlates with stress transmission in the environmental signaling pathway of Bacillus subtilis. J. Bacteriol. 186: 6124-6132

Errington et al (2003). Cytokinesis in bacteria. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 67: 52-65.

Yu & Margolin. (1999). FtsZ ring clusters in min and partition mutants: role of both the Min system and the nucleoid in regulating FtsZ ring localization. Mol. Microbiol. 32: 315-326

Steiner et al. (1999). The cytoplasmic domain of FtsK protein is required for resolution of chromosome dimmers. Mol. Microbiol. 31: 579-583

Hu et al. (2003). Recruitment of MinC, an inhibitor of Z-ring formation to the membrane in E. coli: role of MinD and MinE. J. Bacteriol. 185: 196-203

Lutkenhaus & Sundaramoorthy (2003). MinD and role of the deviant WalkerA motif, dimerization and membrane binding in oscillation. Mol. Microbiol. 48: 295-303

Khvorova et al. (1998). The SpoIIE locus is involved in the SpoOA-dependent switch in the location of FtsZ rings in Bacillus subtilis. J. Bacteriol. 180: 1256-1260

Wu & Errington (2003). RacA and the Soj-SpoOJ system combine to effect polar chromosome segregation in sporulating Bacillus subtilis. Mol. Microbiol. 49: 1463-1475

Eichenberger et al (2001). A three protein inhibitor of polar septation during sporulation in Bacillus subtilis. Mol. Microbiol. 42: 1147-1162

Perego (1998). Kinase-phosphatase competition regulates Bacillus subtilis development. Trends in Microbiol. 6: 366-370

Lazazzera & Grossman (1998). The ins and outs of peptide signaling. Trends in Microbiol. 6: 288-294

Hilbert & Piggot (2004). Compartmentalization of gene expression during Bacillus subtilis spore formation. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 68: 234-262

Novick & Muir (1999). Virulence gene regulation by peptides in staphylococci and other Gram-positive bacteria. Curr. Opin. Microbiol. 2: 40-45

Kuipers et al (1995). Autoregulation of nisin biosynthesis in Lactococcus lactis by signal transduction. J. Biol. Chem. 270: 27299-27304

Michiels et al (2001). Processing and export of peptide pheromones and bacteriocins in Gram-negative bacteria. Trends in Microbiol. 9: 164-168

Bassler (1999). How bacteria talk to each other: regulation of gene expression by quorum sensing. Curr Opin. Microbiol. 2: 582-587

Lenz et al. (2004). The small RNA chaperone Hfq and multiple small RNAs control quorum sensing in Vibrio harveyi and Vibrio cholerae. Cell, 118: 69-82

Zhu & Winans (2001). The quorum-sensing transcriptional regulator TraR requires its cognate signaling ligand for protein folding, protease resistance and dimerization. PNAS 98: 1507-1512

Pappas & Winans (2003). A LuxR type regulator from Agrobacterium tumefaciens elevates Ti plasmid copy number by activating transcription of plasmid replication genes. Mol. Microbiol. 48: 1059-1073

Chen et al (2004). Quorum-sensing antiactivator TraM forms a dimmer that dissociates to inhibit TraR. Mol. Microbiol. 52: 1641-1651

Kaiser (2004). Signaling in Myxobacteria. Ann. Rev. Microbiol. 58: 75-98


Avaliação

Exame teórico com consulta (50%)
Testes “multichoice” ao longo do semestre (15%)
Seminário (15%)
Relatório sobre as práticas na forma de artigo (20%)
Página Web da Disciplina