1. As moléculas da Biologia Molecular: DNA, RNA e proteínas
•  Aspectos particulares da composição e estrutura do DNA, RNA e proteínas.
•  EG - Características bioquímicas dos ácidos nucleicos, importantes no estudo e análise destas moléculas em laboratório:
2. O Dogma Central da Biologia Molecular
3. Genoma
•  Estrutura global dos cromossomas; cromossoma procariótico e eucariótico
•  Distribuição, organização e estrutura dos genes nos genomas procariótico e eucariótico.
•  Outros elementos genéticos dos procariotas e eucariotas. DNA plasmídico e transposões.
•  DNA mitocondrial e cloroplastidial. Hereditariedade citoplásmica.
•  Os diferentes genomas virais: características, estrutura e organização dos genes.
•  EG - Clonagem molecular: vectores e hospedeiros de clonagem. Construção de bibliotecas genómicas e de cDNA. Sondas moleculares. Técnicas de hibridação. Técnica de “Southern blot” e “DNA fingerprinting”.
4. Replicação do material genético
•  Enzimologia da replicação do DNA cromossomal em Escherichia coli e paralelismo com a dos eucariotas
•  EG - Técnica de PCR e algumas aplicações. Técnica dos terminadores de cadeia na sequênciação do DNA.
5. Recombinação molecular do material genético
•  Enzimologia da recombinação homóloga em E. coli
•  Recombinação sítio-específica.
•  Recombinação genética e transferência de genes: transformação, transdução, e conjugação bacteriana.
6. Mutação génica, mutagénese e reparação
•  Tipos de mutações génicas e causas.
•  Base molecular da mutação
•  Mecanismos de reparação do DNA
•  EG - Alguns processos de mutagénese ao acaso e dirigida e sua finalidade.
7. Expressão génica
•  Transcrição em procariotas e eucariotas: polimerases de RNA, RNAs mensageiros, sequências promotor, terminadores e factores de transcrição
•  Tradução: código genético, RNAs de transferência, RNAs ribossomais e síntese proteica
•  EG - análise da expressão de genes. Northern blot e Western blot. Técnicas de “band shift” e de “DNA footprinting”
8. Regulação da expressão génica
•  O operão lac como paradigma de regulação de expressão em procariotas
•  Degradação do mRNA
•  Interferência do RNA
•  Regulação a nível da tradução
•  Modificação de proteínas.
9. Aplicações da Biologia Molecular
•  Genomas sequenciados: uma nova forma de estudar e manipular os organismos.
•  Técnicas utilizadas em medicina forense.
•  Construção de organismos transgénicos. Processos e aplicações.

I- Noções básicas e gerais sobre “Observação das Moléculas da Biologia Molecular”
II- Mapa físico do plasmídio pBR322
III- “Sub-clonagem do gene murB de Bacillus subtilis no vector de expressão pMal-p2”. Uma experiência de clonagem.
III.1- Digestão e purificação do vector de clonagem pMal-p2 e do plasmídio recombinante pGR28 contendo o gene murB (inserto).
III.2- Ligação do DNA vector/inserto
III.3- Preparação de meios de cultura e selecção
III.4- Preparação de células competentes e transformação bacteriana
III.5- Extracção de DNA plasmídico em pequena escala (minipreps) e análise dos clones recombinantes
III.6- Indução da expressão do gene murB e observação da proteína MurB em gel SDS/PAGE

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Problemas práticos sobre Sistemas de Modificação e Restrição em Bactérias PDF

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1 Apresentação: programa teórico e prático, bibliografia e avaliação PDF

2 Dogma Central e Estrutura das Moléculas da Biologia Molecular PDF

3 Sistemas de Modificação e Restrição em Bactérias. Características das enzimas de restrição de tipo II. Primeiras noções de clonagem molecular- construção de moléculas de DNA recombinante PDF

4- Genoma I  PDF

5- Genoma II DNA repetitivo  PDF

6- Genoma III DNA plasmídico  PDF

7- Genoma IV DNA extracromossómico  PDF

8 - Replicação do DNA PDF

9 - PCR PDF

10 - Sequenciação do DNA PDF

11 - Mutação e Reparação do DNA PDF

12- Transcrição I PDF

13 - Transcrição II PDF

14 - Organização genética, síntese, processamento e função dos RNAs PDF

15 - RNA editing, degradação do RNA e RNAi PDF

16 - Tradução e regulação da tradução em procariotas e eucariotas PDF

17 - Proteínas: síntese, processamento e degradação  PDF

18 - Recombinação Molecular PDF

19 - DNA móvel PDF

20 - Genómica PDF


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